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本试剂盒通过荧光标记磷酸化Ser28位点的H3组蛋白，标记进入有丝分裂M期的细胞，搭配核酸荧光染料，从而计算这些阳性细胞在总细胞数中的占比。本试剂盒适用于荧光显微镜和高内涵分析。

有丝分裂，又称为间接分裂，由W.Fleming (1882)年首次发现于动物及E.Strasburger发现于植物。特点是有纺锤体染色体出现，子染色体被平均分配到子细胞，这种分裂方式普遍见于高等动植物(动物和高等植物)。有丝分裂是真核细胞分裂产生体细胞的过程。

有丝分裂指数是用来表示细胞倍增速度的指数。它可以反映在给定时刻进入有丝分裂的细胞占所有细胞的比例(%)。

组蛋白是真核生物中呈强碱性的蛋白。组蛋白可以被乙酰化、磷酸化、甲基化和泛素化修饰。这些修饰会改变染色质的空间结构，从而在基因转录调控、染色体装配等过程中起重要作用。Histone H3的Ser10，Ser28和Thr11都会发生磷酸化修饰。Histone H3的这些磷酸化和有丝分裂或减数分裂过程中的染色质浓缩密切相关。

1. 染色液制备：以下染液请在使用前新鲜配制：以下染液请在使用前新鲜配制，以下方法针对，以下方法针对96孔板培养细胞设计。
   制备固定液：1.5mL的16%多聚甲醛水溶液加入到4.5mL PBS中，得到4%的多聚甲醛固定液。
   制备促渗液：加15μL的Triton X-100到6mL的PBS中。
   制备封闭液：溶解0.25g的BSA到25mL的PBS中，混匀。
   试剂B工作液(一抗工作液)：按1：100比例，将Histone H3.1 (pSer28)抗体溶液(试剂B)加到相应体积的封闭液中。
   试剂C工作液(二抗/工作液)：每1mL的封闭液中加入4μL的Alexa Fluor 488山羊抗兔IgG(试剂C)，配成二抗工作液。
   
2. 关于96孔细胞培养板染色操作(以A549细胞为例)：
   
   1. 处理细胞，保证细胞培养液的总体积在100μL。
      注：活细胞培养中DMSO浓度不要超过0.5%。
      
   2. 细胞处理完毕后不要移去培养基。
      
   3. 加入50μL的试剂A工作液，总体积为150μL，正常细胞培养条件孵育30分钟。
      
   4. 移去培养基。
      
   5. 每孔加入100μL固定液，室温孵育15分钟。
      
   6. 移去固定液，PBS洗涤一次。
      
   7. 以100μL促渗液每孔，室温孵育细胞15分钟。
      
   8. 移去促渗液，PBS洗涤一次。
      
   9. 每孔加入100μL的封闭液，室温孵育60分钟，移去封闭液。
      
   10. 加入50μL一抗工作液，室温孵育60分钟。
       
   11. 移去一抗工作液，PBS洗涤三次。
       
   12. 加入50μL的二抗/复染工作液，室温避光孵育60分钟。
       
   13. 移去二抗/复染工作液，PBS洗涤三次。
       
   14. 加入100μL的PBS每孔，上机分析。