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本试剂盒通过荧光标记磷酸化Ser28位点的H3组蛋白，标记进入有丝分裂M期的细胞，搭配核酸荧光染料，计算这些阳性细胞在总细胞数中的占比。本试剂盒适用于荧光显微镜和高内涵分析。

有丝分裂，又称为间接分裂，由W.Fleming(1882)年首次发现于动物及E.Strasburger发现于植物。特点是有纺锤体染色体出现，子染色体被平均分配到子细胞，这种分裂方式普遍见于高等动植物(动物和高等植物)。有丝分裂是真核细胞分裂产生体细胞的过程。

有丝分裂指数是用来表示细胞倍增速度的指数。它可以反映在给定时刻进入有丝分裂的细胞占所有细胞的比例(%)。

组蛋白是真核生物中呈强碱性的蛋白。组蛋白可以被乙酰化、磷酸化、甲基化和泛素化修饰。这些修饰会改变染色质的空间结构，从而在基因转录调控、染色体装配等过程中起重要作用。Histone H3的Ser10，Ser28和Thr11都会发生磷酸化修饰。Histone H3的这些磷酸化和有丝分裂或减数分裂过程中的染色质浓缩密切相关。

1. 试剂使用前，请短暂离心，使瓶内液体离心沉降至管底。
   
2. 荧光染料都存在淬灭的问题，实验操作时请尽量注意避光，以减缓荧光淬灭，建议染色后尽量当天完成检测，为减缓荧光淬灭可以使用抗荧光淬灭封片胶封片。
   
3. 为保证您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。

1. 染色液制备
   以下染液请在使用前新鲜配制。
   
   1. 制备通透液：0.05mL Triton X-100加到9.95mL ddH2O中，制备0.1% Triton X-100。
      
   2. 制备封闭液：溶解0.25g的BSA到25mL的PBS中，混匀，制备1% BSA。
      
   3. 一抗工作液：按1∶100比例，将Histone H3.1(pSer28)抗体溶液加到相应体积的封闭液中。
      
   4. 二抗工作液：每1mL的封闭液中加入4μL的Alexa Fluor 488山羊抗兔IgG，配成二抗工作液。
2. 细胞培养及染色操作
   
   1. 自然晾干细胞样本(细胞涂片或爬片)，浸入染色液中30min或至过夜，改善细胞的渗透性，PBS浸洗3次，每次3min；
      
   2. 每孔加入0.1% TritonX-100(PBS配制)200μL，孵育5min；
      
   3. 弃去0.1% TritonX-100，PBS冲洗3次；
      
   4. 加入1% BSA，孵育20min；
      
   5. 抗原-抗体反应：滴加一抗工作液50～100μL，37℃，湿盒孵育2h；
      
   6. PBS浸洗3次；
      
   7. 一抗二抗反应：滴加一抗工作液50～100μL，37℃，避光孵育1h；
      
   8. PBS浸洗3次；
      
   9. 复染：每张片子滴加配制细胞核染料(蓝)50～100μL，室温避光放置5min；
      
   10. 封片：用防淬灭封片胶封片；
       
   11. 观察：显微镜下观察细胞中蛋白的表达情况。